1990年,刘玉翠凭借电影《庙街皇后》获得第10届香港电影金像奖最佳女配角奖和最佳新人奖并入围第27届台湾电影金马奖最佳女配角奖。
1992年,出演由曹建南执导的恐怖动作电影《花货》,在剧中饰演夜总会歌星明头。同年,由新艺宝公司发行首张专辑《NotSoSorry》。
1993年,接着又推出第二张同名专辑《刘玉翠》。同年,获得香港十大中文金曲最有前途新人奖女歌手铜奖。1995年,刘玉翠与狄龙,廖启智,黄日华等出演由庄伟健监制的古装破案剧《
包青天》。
1997年,与黄日华、樊少皇、陈浩民共同出演根据金庸同名小说改编的古装武侠剧《
天龙八部》,并凭借在剧中饰演的冷血残忍的阿紫一角受到观众的关注。同年,刘玉翠与陈小春、马浚伟、梁小冰等出演由香港TVB出品的古装武侠电剧《
鹿鼎记》,在居中饰演娇生惯养且刁蛮泼辣的建宁公主。
2000年,参与拍摄香港无线电视出品的民国家族剧《酒是故乡醇》。2001年,出演由陈浩民、温碧霞、苑琼丹主演的古装神话剧《
封神榜》。2002年,与林峰、叶璇、马德钟共同出演根据清代女作家陈端生的长篇弹词小说改编的古装剧《再生缘》。
2003年,出演由香港电视广播有限公司出品的长篇处境喜剧《皆大欢喜》。2006年,出演由林志华执导时装剧集《爱情全保》(英文名:LoveGuaranteed),凭借该剧获得TVB万千星辉颁奖典礼最佳女配角奖提名。
2008年,出演由郭晋安、郭羡妮主演的TVB时装剧《古灵精探B》(原名《古灵精探Ⅱ》),在剧中饰演于子朗的阿姨简致美(Anastasia)。2009年,出演由潘嘉德监制的TVB古装武打剧《王老虎抢亲》(英文:ABrideForARide),居中饰演王老虎姑姐王桂菲。随后又与欧阳震华、宣萱、陈山聪共同出演TVB古装悬疑剧《施公奇案Ⅱ》。
2010年,出演由梁材远监制清装剧《蒲松龄》(巡礼名《写我仙凡间》)。同年,她又参与拍摄由广东电视台出品的家庭喜剧《妹仔大过主人婆》。
2011年,刘玉翠跟无线约满后离开TVB转投香港电视网络。
2012年,参与拍摄由香港电视(HKTV)制作的时装医务剧《三面形医》(英语:HiddenFaces),在剧情饰演赵彩琼。
2014年8月,参与拍摄由银都机构、寰宇娱乐及北京剧魔影业出品的情感电影《
可爱的你》。